В гнездах располагаются объективы. Виды микроскопов: описание, основные характеристики, назначение. Чем электронный микроскоп отличается от светового? Задание для самостоятельной подготовки

Лабораторное занятие по ботанике №1

Тема: «Строение микроскопа. Приготовление временных препаратов. Строение растительной клетки. Плазмолиз и деплазмолиз.»

Цель: 1. Изучить строение микроскопа (марок - МБР, МБИ, Биолам), назначение его частей. Усвоить правила работы с микроскопом.

• 2. Усвоить методику приготовления временных препаратов.
• 3. Изучить структурные основные компоненты растительной клетки: оболочку, цитоплазму, ядро, пластиды.
• 4. Познакомиться с явлением плазмолиза и деплазмолиза.
• 5. Научиться сравнивать между собой клетки различных тканей, находить в них одинаковые и различные черты.

Оборудование: микроскоп, набор для микрокопирования, раствор хлористого натрия или сахарозы, раствор йода в йодистом калии, полоски фильтровальной бумаги, глицерин, метиленовый синий, ломтики арбуза, томата, лук с антоцианом. микроскоп препарат клетка

• 1. Ознакомиться с устройством биологического микроскопа МБР - 1 или Биолам. Записать назначение основных частей.
• 2. Ознакомиться с устройством стереоскопических микроскопов МБС - 1.
• 3. Записать правила работы с микроскопом.
• 4. Усвоить методику изготовления временных препаратов.
• 5. Изготовить препарат эпидермы сочной чешуи лука и рассмотреть при малом увеличении участок эпидермы, состоящий из одного слоя клеток с хорошо заметными ядрами.
• 6. Изучить строение клетки при большом увеличении, сначала в капле воды, затем в растворе йода в йодистом калии.
• 7. В клетках чешуи лука вызвать плазмолиз, воздействуя раствором хлористого натрия. Затем перевести в состояние деплазмолиза. Зарисовать.

Общие замечания

Биологический микроскоп - это прибор, с помощью которого можно рассмотреть различные клетки и ткани растительного организма. Устройство этого прибора довольно просто, однако неумелое пользование микроскопом приводит к его порче. Вот почему необходимо усвоить строение микроскопа, основные правила работы с ним. В микроскопе любой марки выделяют следующие части: оптическую, осветительную и механическую. К оптической части относят: объективы и окуляры.

Объективы служат для увеличения изображения объекта и состоят из системы линз. Степень увеличения объектива находятся в прямой зависимости от числа линз. Объектив с большим увеличением имеет 8 - 10 линз. Первую линзу, обращенную к препарату, называют фронтальной. Микроскоп МБР - 1 снабжен тремя объективами. Увеличение объектива обозначено на нем цифрами: 8х, 40х, 90х. Различают рабочее состояние объектива, т. е. расстояние от покровного стекла до фронтальной линзы. Рабочее расстояние при объективе 8х равно 13,8 мм, при объективе 40х - 0,6 мм, при объективе 90х - 0,12 мм. Необходимо очень аккуратно и бережно обращаться с объективами большего увеличения, чтобы ни в коем случае не повредить фронтальную линзу. С помощью объектива в тубусе получают увеличенное, действительное, но обратное изображение объекта и выявляют детали его структуры. Окуляр служит для увеличения изображения, идущего от объектива и состоит из 2 - 3 линз, вмонтированных в металлический цилиндр. Увеличение окуляра обозначено на нем цифрами 7х, 10х,15х.

Для определения общего увеличения следует умножить увеличение объектива на увеличение окуляра.

Осветительное устройство состоит из зеркала, конденсора с ирисовой диафрагмой и предназначено для освещения объекта пучком света.

Зеркало служит для собирания и направления лучей света, падающего от зеркала на объект. Ирисовая диафрагма расположена между зеркалом и конденсором, состоит из тонких металлических пластинок. Диафрагма служит для регулирования диаметра светового потока, направляемого зеркалом через конденсор на объект.

Механическая система микроскопа состоит из подставки микро - и макровинтов, тубусодержателя, револьвера и предметного столика. Микрометрический винт служит для незначительного перемещения тубусодержателя, а и объектива, на расстояния, измеряемые микрометрами (мкм). Полный оборот микровинта передвигает тубусодержатель на 100 мкм, а поворот на одно деление на 2 мкм. Во избежание порчи микрометрического механизма разрешается поворачивать микрометрический винт в сторону не более чем на половину оборота.

Макровинт используют для значительного перемещения тубусодержателя. Обычно пользуются им при фокусировке объекта на малом увеличении. В тубус - цилиндр сверху вставляют окуляры. Револьвер предназначен для быстрой смены объективов, которые ввинчены в его гнезда. Центрированное положение объектива обеспечивает защелка, расположенная внутри револьвера.

Предметный столик предназначен для расположения на нем препарата, который фиксируется на нем с помощью двух замков.

Правила работы с микроскопом

• 1. мягкой салфеткой протирают оптическую часть микроскопа.
• 2. ставят микроскоп у края стола так, чтобы окуляр находился на против левого глаза экспериментатора и в течение работы микроскоп не передвигают. Тетрадь и все предметы, необходимые для работы располагают справа от микроскопа.
• 3. открывают полностью диафрагму. Конденсор ставят в полуопущенное положение.
• 4. при помощи зеркала настраивают солнечный «зайчик», глядя в отверстие предметного столика. Для этого линза конденсора, находящегося под отверстием предметного столика, должна быть ярко освещена.
• 5. переводят микроскоп при малом увеличении (8х) в рабочее положение - устанавливают объектив на расстоянии 1 см от предметного столика и, глядя в окуляр, проверяют освещенность поля зрения. Оно должно быть ярко освещено.
• 6. на предметный столик помещают изучаемый объект и медленно поднимают тубус микроскопа до появления четкого изображения. Просматривают весь препарат.
• 7. для изучения какого - либо участка объекта при большом увеличении сначала ставят этот участок в центр поля зрения малого объектива. После этого поворачивают револьвер так, чтобы объектив 40х занял рабочее положение (объектив не поднимать!). С помощью микроскопа добиваются четкой видимости изображения объекта.
• 8. после окончания работы переводят револьвер с большого увеличения на малое. Снимают с рабочего столика объект, переводят микроскоп в нерабочее состояние.

Методика приготовления микропрепарата

• 1. на предметное стекло наносят каплю жидкости (вода, спирт, глицерин).
• 2. препаровальной иглой берут часть объекта и помещают его в каплю жидкости. Иногда делают срез изучаемого органа при помощи бритвы. Затем, выбрав самый тонкий срез, кладут его на предметное стекло в каплю жидкости.
• 3. закрывают объект покровным стеклом так, чтобы под него не попал воздух. Для этого покровное стекло берут двумя пальцами за грани, проводят нижнюю грань к краю капли жидкости и плавно опускают, придерживая его препаровальной иглой.
• 4. препарат помещают на предметный столик и рассматривают.

Ход лабораторного занятия

Из мясистой чешуи луковицы скальпелем вырезать небольшой кусочек (около 1 см 2). С внутренней стороны (вогнутой) пинцетом снять прозрачную пленку (эпидерму). Положить в приготовленную каплю и наложить покровное стекло.

При слабом увеличении найти наиболее освещенное место (наименее поврежденное, без складок и пузырьков). Перевести на сильное увеличение. Рассмотреть и зарисовать одну клетку. Отметить оболочку с порами, постенный слой цитоплазмы, ядро с ядрышками, вакуоль с клеточным соком. Затем с одной стороны покровного стекла капают раствор хлористого натрия (плазмолитик). С противоположной стороны, не сдвигая препарата, начинают отсасывать воду кусочками фильтровальной бумаги, при этом необходимо смотреть в микроскоп и следить за тем, что происходит в клетках. Обнаруживают постепенное отхождение протопласта от оболочки клетки, вследствие выхода воды из клеточного сока. Наступает такой момент, когда протопласт внутри клетки отделяется от оболочки полностью и принимает полный плазмолиз клетки. Затем меняют плазмолитик водой. Для этого осторожно помещают каплю воды на границу покровного стекла с предметными медленно отмывают препарат от плазмолитика. Наблюдают, что постепенно клеточный сок заполняет весь объем вакуоли, цитоплазма применяется к оболочке клетки, т.е. наступает деплазмолиз.

Следует зарисовать клетку в плазмолированном и деплазмолированном состояниях, обозначить все части клетки: ядро, оболочку, цитоплазму.

По таблицам зарисовать схему субмикроскопического строения растительной клетки, обозначить все компоненты.

Кожица лука

Цитоплазма ядро оболочка

Кожица лука. Органоиды клетки.

Цитоплазма - это обязательная составная часть клетки, в которой происходят сложные и разнообразные процессы синтеза, дыхания, роста.

Ядро - одно из важнейших органоидов клетки.

Оболочка - это поверхностный слой, обтягивающий покрывающий что - нибудь.

Плазмолиз при добавлении раствора натрий хлор

Плазмолиз - это отставание цитоплазмы от клеточной оболочки, которое происходит в результате потери воды вакуолью.

Деплазмолиз

Деплазмолиз - это явление при котором протопласт возвращается в обратное состояние.

Плазмолиз при добавлении сахарозы

Деплазмолиз при добавлении сахарозы

Вывод: Сегодня мы ознакомились с устройством биологического микроскопа, так же усвоили методику приготовления временных препаратов. Мы изучали основные структурные компоненты растительной клетки: оболочку, цитоплазму, ядро на примере кожицы лука. И ознакомились с явлением плазмолиза и деплазмолиза.

Вопросы для самоконтроля

• 1. Какие части клетки можно рассмотреть в оптический микроскоп?
• 2. Субмикроскопическое строение растительной клетки.
• 3. Какие органеллы составляют субмикроскопическую структуру ядра?
• 4. Каково строение цитоплазматической мембраны?
• 5. Отличия растительной клетки от животной?
• 6. Как доказать проницаемость клеточной мембраны?
• 7. Значение плазмолиза и деплазмолиза для растительной клетки?
• 8. Как осуществляется связь между ядром и цитоплазмой?
• 9. Место изучения темы «Клетка» в курсе общей биологии средней школы.

Литература

• 1. А.Е. Васильев и др. Ботаника (анатомия и морфология растений), «Просвещение», М,1978, с.5-9, с.20-35
• 2. Киселева Н.С. Анатомия и морфология растений. М. «Высшая школа»,1980, с.3-21
• 3. Киселева Н.С., Шелухин Н.В. Атлас по анатомии растений. . «Высшая школа»,1976
• 4. Хржановский В.Г. и др. Атлас по анатомии и морфологии растений. «Высшая школа», М., 1979, с.19-21
• 5. Воронин Н.С. Руководство к лабораторным занятиям по анатомии и морфологии растений. М., 1981, с.27-30
• 6. Тутаюк В.Х. Анатомия и морфология растений. М. «Высшая школа»,1980, с.3-21
• 7. Д.Т. Конысбаева ПРАКТИКУМ ПО АНАТОМИИ И МОРФОЛОГИИ РАСТЕНИЙ

В микроскопе различают механическую и оптическую части. Механическая часть представлена штативом (состоящим из основания и тубусодержателя) и укрепленным на нем тубусом с револьвером для крепления и смены объективов. К механической части относятся также: предметный столик для препарата, приспособления для крепления конденсора и светофильтров, встроенные в штатив механизмы для грубого (макромеханизм, макровинт) и тонкого (микромеханизм, микровинт) перемещения предметного столика или тубусодержателя.

Оптическая часть представлена объективами, окулярами и осветительной системой, которая в свою очередь состоит из расположенных под предметным столиком конденсора Аббе и встроенного осветителя с низковольтной лампой накаливания и трансформатором. Объективы ввинчиваются в револьвер, а соответствующий окуляр, через который наблюдают изображение, устанавливают с противоположной стороны тубуса.

Рисунок 1. Устройство микроскопа

К механической части относится штатив, состоящий из основания и тубусодержателя. Основание служит опорой микроскопа и несет всю конструкцию штатива. В основании находится также гнездо для зеркала или встроенный осветитель.

• предметный столик, служащий для размещения препаратов и горизонтальногоих перемещения;
• узел для крепления и вертикального светофильтров.

В большинстве современных микроскопов фокусировка осуществляется путем вертикального перемещения предметного столика с помощью макро- и микромеханизма при неподвижном тубусодержателе. Это позволяет установить на тубусодержатель различные насадки (микрофото и т.п.). В некоторых конструкциях микроскопов, предназначенных для работы с микроманипулятором, фокусировка осуществляется вертикальным перемещением тубусодержателя при неподвижном предметном столике.

Тубус микроскопа - узел, служащий для установки объективов и окуляров на определенном расстоянии друг от друга. Он представляет собой трубку, в верхней части которой находится окуляр или окуляры, а в нижней - устройство для крепления и смены объективов. Обычно это револьвер с несколькими гнездами для быстрой смены объективов различного увеличения. В каждом гнезде револьвера объектив закреплен таким образом, что он всегда остается центрированным по отношению к оптической оси микроскопа. В настоящее время конструкция тубуса существенно отличается от прежних микроскопов тем, что части тубуса несущие окуляры и револьвер с объективами, конструктивно не связаны. Роль средней части тубуса может выполнять штатив.
Механическая длина тубуса биологических микроскопов обычно составляет 160мм. В тубусе между объективом и окуляром могут располагаться призмы, изменяющие направление хода лучей и промежуточные линзы, изменяющие окулярное увеличение и оптическую длину тубуса.

Существуют различные взаимозаменяемые конструкции участка тубуса, несущего окуляры (прямой и наклонный) и различающиеся по количеству окуляров (окулярные насадки):

• монокулярные - с одним окуляром, для наблюдения одним глазом;
• бинокулярные - с двумя окулярами, для одновременного наблюдения двумя глазами, которые могут различаться по конструкции в зависимости от модели микроскопа;
• тринокулярные - с двумя окулярами и проекционным выходом, позволяющие одновременно с визуальным наблюдением двумя глазами, проецировать изображение препарата соответствующей оптикой на монитор компьютера или другой приемник изображения.

Помимо тубусодержателя с тубусом к механической части микроскопа относятся:

• кронштейн для крепления предметного столика;
• предметный столик, служащий для размещения препаратов и горизонтального перемещения в двух перпендикулярных направлениях относительно оси микроскопа. Конструкция некоторых столиков позволяет вращать препарат. Вертикальное перемещение предметного столика осуществляется макро- и микромеханизмом.
• приспособления для крепления и вертикального перемещения конденсора и его центрировки, а также для помещения светофильтров.

Тема 1. КЛЕТКА

§6. СТРОЕНИЕ МИКРОСКОПА

Вы ознакомиться со строением микроскопа и узнаете, как рассчитывать его увеличение.

Будем ли мы работать с микроскопом?

Что можно увидеть в микроскоп, кроме бактерия?

Микроскоп (от греческого «микрос»- малый и «скопео» - смотреть, рассматривать) - где увеличительный прибор, который позволяет рассматривать предмет и очень малого размера. Конструкция школьного микроскопа почти такая же, как в лучших исследовательских микроскопов первой половины XX века. (мл. 6). При правильной настройке школьный микроскоп позволяет увидеть не только клетку, но и отдельные ее внутренние структуры. А при наличии определенного опыта - даже выполнять некоторые интересные эксперименты.

Микроскоп состоит а корпуса и элементов оптической системы, через которые проходит свет.

Частями корпуса являются:

✓ основание;

Рис. в. Внешний вид и основные составляющие школьного микроскопа

✓ предметный столик, на котором размещается опытный образец, закрепляется на столике с помощью двух гибких держателей;

В штатив с изменяемым углом наклона, на котором находятся большой винт грубой настройки четкости (макрогвинт), и меньший винт точной настройки четкости (мікрогвинт);

✓ тубус, на нижней части которого крепится револьверная насадка с объективами, а в верхнюю часть укладывается окуляр.

К элементам оптической системы микроскопа относятся:

✓ вогнутое зеркало, которое можно поворачивать;

В диафрагма, что находится под предметным столиком;

✓ револьверная насадка с объективами разного увеличения;

✓ окуляр, в который наблюдают объект исследования.

Зеркало используют для настройки наилучшего освещения препарата. Диафрагмой регулируют контрастность и яркость изображения: если диафрагма закрыта, изображение очень контрастное, однако темное; если диафрагма полностью открыта, то контрастность мала, а света много, поэтому изображение переосвітлене.

Рис. 7. Объективы (а), окуляр (б) школьного микроскопа и их маркировка

Объектов. Школьный микроскоп имеет три объектива: очень малого (4-кратного), малого (10-кратного) и большого (40-кратного) увеличения. Для легкой их смены они вкручены в револьверную насадку. Объектив, который расположен вертикально вниз, в направлении к объекту исследования, включенный в оптическую систему, другие - выключены. Поворачивая револьверную насадку, можно менять рабочий объектив и, таким образом, переходить от одного увеличения к другому. При включении другого объектива в оптическую систему слышен легкий щелчок - это срабатывает пружинный фиксатор револьверной насадки.

Объектив является главным элементом оптической системы микроскопа. На объективе цифрами обозначены его технические характеристики.

В верхней строке первой цифрой обозначается увеличение объектива (жал. 7).

Произведение увеличения объектива и увеличения окуляра показывает общее увеличение микроскопа. Например, при включенном 4-кратном объективе и 10-кратном окуляре общее увеличение микроскопа составляет: 4 ∙ 10 = 40 (раз).

При работе с микроскопом на предметный столик кладут опытный образец, закрепляют его держателями, включают объектив малого увеличения (10-кратннй). Вращая зеркальце, направляют на препарат свет, и макрогвинтом настраивают четкость. Далее, при необходимости, включают объектив большого увеличения, підрегульовують четкость мікрогвинтом и контрастируют изображение диафрагмой.

Работая с микроскопом, придерживайтесь таких правил:

1. Линзы окуляров и объективов нужно предохранять от загрязнения и механических повреждений: не касаться пальцами и твердыми предметами, не допускать попадания на них воды и других веществ.

2. Запрещается раскручивать оправы окуляра и объективов, разбирать механические детали микроскопа - их ремонтируют только в специальных мастерских.

3. Переносить микроскоп надо двумя руками в вертикальном положении, держа прибор одной рукой за штатив, а другой - за его основу.

ТЕРМИНЫ И ПОНЯТИЯ, КОТОРЫЕ НУЖНО УСВОИТЬ

Объектив, общее увеличение микроскопа.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Из каких элементов состоит оптическая система микроскопа?

2. Элементы оптической системы микроскопа обеспечивают общее увеличение?

3. Для чего используется вогнутое зеркало?

4. Каково назначение диафрагмы?

5. Объектив включают в начале работы с микроскопом?

6. Какое максимальное увеличение можно получить игры применении объективов и окуляра, изображенных на рисунке 7?

7. Каких правил нужно придерживаться при работе с микроскопом?

ЗАДАЧИ

Внимательно рассмотрите ваш школьный микроскоп, найдите все его составляющие. Запишите увеличения окуляра и объектива. Рассчитайте увеличение микроскопа для каждого из объективов. Результаты запишите в таблицу в тетради.

ДЛЯ ЛЮБОЗНАТЕЛЬНЫХ

Как определить размер наименьших объектов, которые можно увидеть в оптический микроскоп?

Размер минимального объекта, который можно увидеть с помощью глаза или увеличительного прибора, определяется его разрешением.

Разрешающая способность - это наименьшее расстояние между двумя точками, на котором их изображения еще разделены и не сливаются в одно. Разрешающая способность глаза человека составляет 200 мкм (0,2 мм), оптического микроскопа - 0,2 мкм (0,0002 мм), электронного микроскопа - 0,0002 мкм (0,0000002 мм). Если размер объекта меньше разрешения, то этот объект рассмотреть уже невозможно, и наоборот. Таким образом, именно от разрешения зависит, что можно увидеть в микроскоп, а что - нет.

Значение показателя, по которому рассчитывают разрешающую способность объектива, нанесено на его корпусе сразу после показателя увеличение объектива. Он называется апертурой объектива.

За апертурой рассчитывают разрешающую способность объектива:

Разрешающая способность (в мкм) = 0,3355 /апертура объектива.

Полученное значение округляют до десятых.

Пример: на объективе с красным кольцом (рис. 7) в верхней строке нанесена маркировка: «4 / 0,10». Цифра «4» указывает на увеличение объектива - четырехкратное, а «0,10» - апертуру. Разрешающая способность этого объектива

будет такая:

0,3355 / 0,10 = 3,355 « 3,4 (мкм).

КЛЕТОК ПРОКАРИОТ И ЭУКАРИОТ

Цели занятия:

· Изучить устройство светового микроскопа, освоить методику установки света, технику приготовления и микроскопирования временных препаратов.

· Познакомиться со строением клетки, научиться отличать прокариотические клетки от эукариотических.

· Научиться правильно оформлять отчет о лабораторной работе.

Вопросы и задания для самоподготовки

1. Биология как наука. Методы биологии.
2. Основные концепции биологии.
3. Основные свойства живых систем.
4. Уровни организации живой материи.
5. Современное определение жизни и живого организма.

6. Основные положения современной клеточной теории.

7. Надцарства (империи) и царства живых организмов.

8. Строение прокариотической клетки.

9. Уметь показать на микроскопе механическую, оптическую и осветительную части и рассказать об их устройстве.

10. Какие бывают окуляры; объективы и их фокусное расстояние. Особенности иммерсионного объектива.

11. Что такое увеличение и разрешающая способность микроскопа?

12. Настройка освещения по методу светлого поля.

13. Основные правила работы с оптическим микроскопом.

14. Постоянные и временные микропрепараты. Основные этапы приготовления временных микропрепаратов.

Оборудование и материалы :

1. Микроскоп Микмед -5 или аналог.

2. Предметные и покровные стекла, чашки Петри, стаканчики с водой, глазные пипетки, пинцеты, ножницы, кусочки ваты, иммерсионное масло.

3. Постоянные микропрепараты: фиксированные окрашенные мазки культур сенной палочки и сарцины, крови лягушки.

4. Материалы для приготовления временных препаратов: 2-3 головки репчатого лука.

5. 0,01% раствор метиленовой сини, раствор иода.

РАБОТА 1.1. Изучение устройства светового микроскопа

Световая микроскопия – один из основных методов изучения биологических объектов, поэтому владение техникой микроскопирования необходимо для всех последующих занятий по биологическим наукам, а также для практической деятельности микробиолога.

Рассмотрим конструкцию световых микроскопов на примере микроскопа отечественного производства Микмед - 5. Световой микроскоп состоит из трех основных частей: механической, осветительной, оптической. К механической ч а с т и относятся: штатив, револьверное устройство, макро- и микрометрические винты, предметный столик (рис.1).

Рисунок 1 – Устройство светового микроскопа Микмед -5

1 – окуляры; 2 – бинокулярная насадка; 3 – винт крепления насадки; 4 – револьверное устройство; 5 – объективы; 6 – штатив; 7 – предметный столик; 8 – кольцо;
9 – рукоятка механизма грубой фокусировки (кремальера); 10 – рукоятка механизма микрометрической фокусировки; 11 – выключатель; 12 – рукоятка регулирования яркости источника света; 13 – винт крепления конденсора; 14 – конденсор; 15 – основание штатива; 16 – препаратоводитель; 17 – рукоятка перемещения объекта в продольном направлении; 18 – рукоятка перемещения объекта в поперечном направлении; 19 – коллектор в корпусе

Штатив состоит из массивного основания и изогнутого под углом тубусодержателя. Основание имеет снизу четыре опорные площадки, что обеспечивает устойчивое положение микроскопа на рабочем столе.

В верхней части тубусодержателя имеется головка для закрепления бинокулярной насадки и гнездо с винтовой нарезкой для револьвера. Тубус (окулярная трубка) представляет собой полую трубку, в верхнюю часть которой вставляется окуляр.

Револьвер (от лат. revolvo – вращаю) – это вращающийся диск с четырьмя гнездами для ввинчивания объективов.

Винт грубой фокусировки микроскопа – макрометрический винт , или кремальера – расположен с левой стороны штатива. С помощью этого винта предметный столик передвигается в вертикальном направлении вверх и вниз на большое расстояние. Макрометрический винт используется при слабом увеличении, когда объект изучается главным образом в одной плоскости.

Рукоятки микрометрической фокусировки (они - меньшего диаметра)расположены с обеих сторон штатива,используются при сильном увеличении и позволяют при их использовании рассматривать детали объекта, лежащие на разной глубине. Ими следует пользоваться только тогда, когда при помощи кремальеры объект поставлен точно в фокус.

Предметный столик представляет собой четырехугольную пластину с отверстием в центре, над которым помещают предметное стекло с изучаемым объектом. Во избежание смещения, предметное стекло фиксируют специальным прижимом препаратоводителя. Справа под предметным столиком находятся рукоятки механизма координатного перемещения, с помощью которого препарат можно передвигать в поперечном и продольном направлениях.
Осв е т и т е л ь н а я ч а с т ь микроскопа состоит из осветителя, конденсора с ирисовой диафрагмой и съемного светофильтра.
Осветитель встроен в основание штатива. Он включается с помощью выключателя, расположенного на боковой поверхности штатива справа от наблюдателя. Яркость источника света можно изменить, вращая рукоятку регулирования яркости источника света (расположена на штативе справа, под выключателем).
Держатель патрона галогенной лампы прикреплен к основанию штатива двумя винтами снизу, доступ к которым обеспечивается при наклоне прибора. Винты в отжатом состоянии позволяют перемещать держатель патрона с лампой в бобовидных отверстиях основания в случае неравномерного освещения объекта. Если в данном микроскопе источником света является светодиод, то его перемещение при настройке освещения не требуется.

Конденсор находится под предметным столиком, состоит из двух линз, закрепленных в общую оправу, вставлен в кронштейн, который крепится к предметному столику. Для перемещения конденсора служит специальная рукоятка, расположенная слева от наблюдателя. Меняя положение конденсора, можно изменять интенсивность освещения объекта: при опускании освещенность уменьшается, при поднимании – увеличивается.

Ирисовая диафрагма вмонтирована в нижнюю часть конденсора. Она представляет собой кольцо с подвижно укрепленными стальными пластинками, которые могут сдвигаться и раздвигаться с помощью особой ручки; в центре остается отверстие для прохождения светового пучка. Диафрагма позволяет регулировать величину светового потока; максимально суженная, она способствует наибольшей четкости изображения.

О п т и ч е с к а я ч а с т ь микроскопа представлена окулярами и объективами.

Окуляр (от лат. oculus – глаз) помещается в верхней части тубуса и обращен к глазу. Окуляр представляет собой две линзы, заключенные в металлическую гильзу. По числу на верхней плоскости окуляра можно судить о кратности его увеличения (х7, х10, х15). Окуляр можно вынимать из тубуса и заменять по мере необходимости другим.

Объектив – это система линз, укрепленных в общей металлической оправе. Объективы ввинчиваются в гнезда револьвера и имеют различную кратность увеличения, которая обозначена числом на их боковой поверхности. Различают объективы малого увеличения (х4 и х10), объектив большого увеличения (х40) и иммерсионный объектив (х100), используемый для изучения наиболее мелких объектов.

Все объективы по способу применения делят на сухие и иммерсионные (от лат. immersio – погружаю или окунаю). У сухих объективов между фронтальной линзой и рассматриваемым препаратом находится воздух. Воздух и стекло имеют разные показатели преломления света (соответственно 1,0 и 1,52), в результате чего лучи света, переходя из одной среды в другую, преломляются, рассеиваются, происходит частичное искажение рассматриваемых объектов (рис.2). У иммерсионных объективов пространство между фронтальной линзой и препаратом заполнено, как правило, кедровым маслом или водой. Предметное стекло, стекло объектива и кедровое масло имеют почти одинаковый показатель преломления света (1,52 и 1,515), поэтому лучи, проходя из одной среды в другую, почти не преломляются, свет не рассеивается, рассматриваемые объекты не искажаются. Показатель преломления света, близкий к таковому стекла, имеют и другие вещества, которые используются в качестве иммерсионных составов: касторовое масло (1,48-1,49), гвоздичное масло (1,53), смесь касторового и гвоздичного масел (1,515).

Рисунок 2 – Ход лучей между конденсором и объективом микроскопа

Справа – сухой объектив, слева – иммерсионный. 1 – линза объектива; 2 – верхняя линза конденсора; 3 – предметное стекло; 4 – объект; 5 – покровное стекло; 6 – иммерсионное масло; 7 – воздух. АБ – луч света, проходящий через воздушную среду, отклоняется и не попадает в объектив; ВГ – луч света, проходящий через иммерсионное масло, попадает в объектив.

Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива на увеличение окуляра. Эта величина, однако, не характеризует всех возможностей микроскопа. Увеличенное изображение может быть как четким, так и нечетким. Отчетливость получаемого изображения определяется разрешающей способностью микроскопа. Под последней понимают минимальное расстояние между двумя видимыми точками, когда они еще не сливаются в одну, т.е. чем лучше разрешающая способность, тем меньший объект можно увидеть.

Разрешающая способность светового микроскопа определяется в основном дифракцией световых лучей и равна примерно половине длины волны используемого света. Освещая препарат светом с более короткой длиной волны (голубым или синим), можно увидеть более мелкие объекты; при этом разрешающая способность микроскопа близка к 0,2 мкм. С этой целью микроскоп укомплектован синим светофильтром.

ЗАДАНИЕ . Ознакомьтесь с устройством световых микроскопов. Найдите и назовите все их основные части.

РАБОТА 1.2. Приготовление временного препарата.

Настройка освещения

Наилучшие результаты при работе с микроскопом могут быть получены лишь при условии правильного освещения объекта. Вот один из способов установки света на микроскопе Микмед - 5.

1. Для настройки микроскопа приготовьте препарат, который представляет собой два положенных крест-накрест волоса. Для приготовления этого временного препарата отрежьте ножницами часть волоса длиной примерно 3 см, разрежьте его пополам и поместите оба кусочка друг на друга на предметное стекло, сделав перекрест. Затем глазной пипеткой нанесите на волосы каплю воды и накройте покровным стеклом.

Постарайтесь избежать образования пузырьков воздуха под покровным стеклом: возьмите покровное стекло за боковые грани и прикоснитесь его ребром к поверхности капли воды с краю так, чтобы вода растеклась по ребру покровного стекла, затем осторожно опустите (уроните) покровное стекло на предметное. Научитесь брать каплю жидкости такого объема, чтобы она заполнила все пространство под покровным стеклом. Слишком малая капля жидкости не заполнит всего пространства, и оставшийся в виде пузырьков воздух затруднит работу. Взяв слишком большую каплю, вы увидите, что вода выступила за пределы покровного стекла. В этом случае избыток воды нужно удалить полоской фильтровальной бумаги.

Препарат поместите на предметный столик и закрепите его прижимом препаратоводителя. Поставьте место перекреста волос точно в центр светового пучка. Вместо указанного препарата может быть использован любой другой препарат, детали которого хорошо различимы при малом увеличении.

2. Установите в рабочее положение объектив малого увеличения (х4). Когда объектив займет срединное положение над отверстием столика, в револьвере сработает защелка, при этом будет слышен легкий щелчок, и револьвер фиксируется. Поднимите конденсор до упора. При переходе к объективам других увеличений положение конденсора по высоте не менять.

3. Смотря сбоку, с помощью макрометрического винта поднимите предметный столик почти до соприкосновения объекта с с фронтальной линзой объектива. Глядя в окуляр, медленным вращением кремальеры в обратном направлении осторожно опускайте предметный столик до тех пор, пока в поле зрения не появятся очертания объекта. С помощью рукоятки механизма микрометрической фокусировки добейтесь резкого изображения объекта.
4. Выньте окуляр из правой окулярной трубки бинокулярной насадки. Наблюдая в окулярную трубку, раскройте апертурную диафрагму конденсора до размера выходного зрачка объектива.
5. Установите окуляр в окулярную трубку, наблюдайте поле зрения окуляра. При неравномерно освещенном поле зрения отцентрируйте лампу, как указано в руководстве по эксплуатации. Для достижения наилучшего качества изображения рекомендуется для каждого объектива прикрывать апертурную диафрагму конденсора на 1/3 выходного зрачка объектива, а также использовать синий светофильтр.
Нормальная работа осветительной системы обеспечивается только при использовании предметных стекол толщиной 1 – 2 мм.

ЗАДАНИЕ . Приготовьте микропрепарат и настройте освещение, как указано выше.

Существуют различные модели учебных и исследовательских световых микроскопов. Подобные микроскопы позволяют определить форму клеток микроорганизмов, их размер, подвижность, степень морфологической гетерогенности, а также способность микроорганизмов к дифференцирующему окрашиванию.

Успех наблюдения объекта и надежность получаемых результатов зависят от хорошего знания оптической системы микроскопа.

Рассмотрим устройство и внешний вид биологического микроскопа, модель XSP–136 (Ningbo teaching instrument Co., LTD), работу его составных частей. Микроскоп имеет механическую и оптическую части (рисунок 3.1).

Рисунок 3.1 –Устройство и внешний вид микроскопа

Механическая часть биологического микроскопа включает штатив с предметным столиком; бинокулярную насадку; рукоятку грубой настройки на резкость; рукоятку точной настройки на резкость; рукоятки перемещения предметного столика вправо/влево, вперед/назад; револьверное устройство.

Оптическая часть микроскопа включает осветительный аппарат, конденсор, объективы и окуляры.

Описание и работа составных частей микроскопа

Объективы. Объективы (тип ахроматы), входящие в комплект микроскопа, рассчитаны на механическую длину тубуса микроскопа 160 мм, линейное поле зрения в плоскости изображения 18 мм и толщину покровного стекла 0,17 мм. На корпусе каждого объектива нанесено линейное увеличение, например, 4х; 10х; 40х; 100х и, соответственно, указана числовая апертура 0,10; 0,25; 0,65; 1,25, а также цветовая маркировка.

Бинокулярная насадка. Бинокулярная насадка обеспечивает визуальное наблюдение изображения объекта; устанавливается в гнездо штатива и закрепляется винтом.

Установка расстояния между осями окуляров в соответствии с глазной базой наблюдателя осуществляется разворотом корпусов с окулярными тубусами в диапазоне от 55 до 75 мм.

Окуляры. В комплект микроскопа входят два широкоугольных окуляра с увеличением 10х.

Револьверное устройство. Четырехгнездное револьверное устройство обеспечивает установку объективов в рабочее положение. Смена объективов производится вращением рифленого кольца револьверного устройства до фиксированного положения.

Конденсор. В комплект микроскопа входит конденсор светлого поля Аббе с ирисовой диафрагмой и фильтром, числовая апертура А=1,25. Конденсор устанавливается в кронштейн под предметным столиком микроскопа и закрепляется винтом. В конденсоре светлого поля имеется ирисовая апертурная диафрагма и откидная оправа для установки светофильтра.

Осветительное устройство. Для получение равномерно освещенного изображения объектов в микроскопе имеется осветительное светодиодное устройство. Включение осветителя осуществляется с помощью выключателя, расположенного на задней поверхности основания микроскопа. Вращая диск регулировки накала лампы, расположенный на боковой поверхности основания микроскопа слева от наблюдателя, можно изменять яркость освещения.

Фокусировочный механизм. Фокусировочный механизм расположен в штативе микроскопа. Фокусирование на объект производится перемещением по высоте предметного столика вращением рукояток, расположенных по обеим сторонам штатива. Грубое перемещение осуществляется рукояткой большего размера, точное перемещение – рукояткой меньшего размера.

Предметный столик. Предметный столик обеспечивает перемещение объекта в горизонтальной плоскости. Диапазон перемещения столика равен 70x30 мм. Объект крепится на поверхности столика между держателем и прижимом препаратоводителя, для чего прижим отводится в сторону.

Работа с микроскопом

Перед началом работы с препаратами необходимо правильно настроить освещение. Это позволяет добиться максимального разрешения и качества изображения микроскопа. Для работы с микроскопом следует отрегулировать раскрытие окуляров таким образом, чтобы два изображения слились в одно. Кольцо диоптрийной коррекции на правом окуляре следует установить «на ноль», если острота зрения обоих глаз одинакова. В противном случае необходимо выполнить общую наводку на резкость, после чего закрыть левый глаз и добиться максимальной резкости для правого, вращая кольцо коррекции.

Исследование препарата рекомендуется начинать с объектива наименьшего увеличения, который используется в качестве поискового при выборе участка для более подробного изучения, затем можно переходить к работе с более сильными объективами.

Убедитесь в том, что объектив 4х готов к работе. Это поможет вам установить предметное стекло на место, а также разместить объект для исследования. Поместите предметное стекло на предметный столик и осторожно зажмите его при помощи пружинных держателей.

Подсоедините сетевой шнур и включите микроскоп.

Всегда начинайте исследование с объективом 4х. Для достижения четкости и резкости изображения исследуемого объекта используйте рукоятки грубой и точной фокусировки. Если при помощи слабого объектива 4х было получено желаемое изображение, поверните револьверное устройство на следующее большее значение 10х. Револьвер должен зафиксироваться в нужном положении.

Наблюдая за объектом в окуляр, поверните рукоятку (большого диаметра) грубой фокусировки. Чтобы получить наиболее четкое изображение используйте рукоятку (маленького диаметра) четкой фокусировки.

Чтобы контролировать поток света, проходящего через конденсор, можно открыть или закрыть ирисовую диафрагму, расположенную под предметным столиком. Изменяя настройки, можно добиться наиболее четкого изображения исследуемого объекта.

Во время фокусировки не следует допускать соприкосновения объектива с объектом исследования. При увеличении объектива до 100х объектив располагается очень близко к предметному стеклу.

Правила обращения и ухода за микроскопом

1 Микроскоп необходимо содержать в чистоте и предохранять от повреждений.

2 Для сохранения внешнего вида микроскопа, его необходимо периодически протирать мягкой салфеткой, слегка пропитанной бескислотным вазелином, предварительно удалив пыль, а затем вытирать сухой мягкой чистой салфеткой.

3 Металлические детали микроскопа необходимо содержать в чистоте. Для чистки микроскопа следует использовать специальные смазочные некоррозирующие жидкости.

4 Для предохранения оптических деталей визуальной насадки от пыли необходимо оставлять окуляры в окулярных тубусах.

5 Нельзя касаться пальцами поверхностей оптических деталей. В случае если на линзу объектива попала пыль, ее следует удалить пыль при помощи вентилятора или кисточки. В случае если пыль проникла внутрь объектива и на внутренних поверхностях линз образовался мутный налет, необходимо отправить объектив для чистки в оптическую мастерскую.

6 Во избежание нарушения юстировки необходимо предохранять микроскоп от толчков и ударов.

7 Во избежание попадания пыли на внутреннюю поверхность линз микроскоп необходимо хранить под чехлом или в упаковке.

8 Не следует самостоятельно разбирать микроскоп и его составные для устранения неисправностей.

Меры безопасности

При работе с микроскопом источником опасности является электрический ток. Конструкция микроскопа исключает возможность случайного соприкосновения к токоведущим частям, находящимся под напряжением.